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                    生物素概述和生物素化3種試劑的蛋白質標記等特性

                    發表時間:2022-07-22  |  點擊率:309
                    一、生物素簡介
                     
                    生物素(biotin,B)分子量244.31D.生物素分子有兩個環狀結構,其中Ⅰ環為咪唑酮環,是與親和素結合的主要部位;Ⅱ環為噻吩環,C2上有一戊酸側鏈,其末端羧基是結合抗體和其他生物大分子的結構,經化學修飾后,生物素可成為帶有多種活性基團的衍生物——活化生物素。
                     
                    生物素是水溶性B族維生素,以前稱為維生素H或輔酶R。它是羧化酶的輔酶,其與纈氨酸、脂肪酸、異亮氨酸等的合成有關。
                     
                    連接各種反應基團的生物素被用來標記蛋白質或抗體。生物素標記的蛋白或抗體可用鏈霉素耦聯的HRP或磁珠進行檢測或純化。
                     
                     
                    二、生物素化試劑包含3種:
                     
                    a. 伯胺反應性生物素化試劑
                     
                    伯胺生物素化試劑基于水溶性分為兩組:NHS-酯和磺基-NHS-酯。
                     
                    1.NHS-酯的特點:
                     
                    蛋白質標記-生物素化抗體或其它蛋白質,用于檢測或純化;
                     
                    細胞內標記-膜滲透性,可用于標記細胞內部;
                     
                    胺反應性-與伯胺(-NH2)反應,例如賴氨酸的側鏈或N端伯胺;
                     
                    溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
                     
                    2.磺基-NHS-酯的特點:
                     
                    蛋白質標記-生物素化抗體,用于固定、純化或檢測;
                     
                    細胞表面標記-不穿透質膜,僅生物素化細胞的表面蛋白;
                     
                    胺反應性-與伯胺(-NH2)反應,例如賴氨酸的側鏈或N端伯胺;
                     
                    溶解性-易溶于水,可用于不能耐受有機溶劑的應用。
                     
                    b. 巰基反應性生物素化試劑
                     
                    巰基反應性生物素化試劑分為兩類:生物素-HPDP和碘乙?;?LC-生物素。
                     
                    1.生物素-HPDP的特點:
                     
                    蛋白質標記-生物素化抗體或其它蛋白質;
                     
                    巰基反應性-與巰基(-SH)反應,例如半胱氨酸(C)的側鏈;
                     
                    吡啶基二硫醇活化-在pH6.5至7.5的緩沖液如PBS中反應;
                     
                    可逆-形成二硫鍵,其可以使用DTT或其它還原劑切割;
                     
                    溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
                     
                    2.碘乙?;?LC-生物素的特點:
                     
                    蛋白質標記-生物素化抗體或其它蛋白質;
                     
                    細胞內標記-膜可透過,可用于標記細胞內部;
                     
                    巰基反應性-與巰基(-SH)反應,例如半胱氨酸(C)的側鏈;
                     
                    碘乙酰激活-反應在pH7.5至8.5的Tris或硼酸鹽緩沖液中避光進行;
                     
                    不可逆-形成不可逆性硫醚鍵,間隔臂不能被切割;
                     
                    溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
                     
                    c. 羰基反應性生物素化試劑
                     
                    生物素-酰肼是通常用于靶向聚糖和糖蛋白的蛋白修飾試劑。
                     
                    生物素-酰肼的特點
                     
                    糖蛋白標記-在唾液酸殘基上生物素化糖基化蛋白,用于檢測或純化;
                     
                    細胞表面標記-生物素化和分離細胞表面糖蛋白;
                     
                    醛反應性-與糖基高碘酸鹽氧化形成的醛反應;
                     
                    酰肼活化-在pH值為4~6的緩沖液如乙酸鈉中進行反應;
                     
                    不可逆的-形成半不可逆性腙鍵;間隔臂不能被切割;
                     
                    溶解性-通常溶于DMSO,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
                     
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